Мы используем технологию cookie для понимания того, как вы пользуетесь нашим сайтом. Под этим подразумевается персонализированный контент и реклама. Для того, чтобы узнать больше - нажмите сюда. Пользуясь данным сайтом вы подтверждаете согласие с нашей политикой. Политика cookie.
Разделы Партнеры Информация LinkXpress
Вход
Реклама на сайте
RANDOX LABORATORIES

Анализ методом петлевой изотермической амплификации обнаруживает клонорхоз в образцах человека

Редакция HospiMedica - Россия
Опубликовано 14 Mar 2018
Print article
Чувствительность анализа методом петлевой изотермической амплификации (LAMP) для обнаружения яиц Clonorchis sinensis в экскрементах, экспериментально меченных с известным количеством яиц в десятикратных серийных разведениях от 10 000 яиц (ряд 1) до одного яйца (ряд 5). Фото любезно предоставлено Медицинским исследовательским центром Сеульского национального университета.
Чувствительность анализа методом петлевой изотермической амплификации (LAMP) для обнаружения яиц Clonorchis sinensis в экскрементах, экспериментально меченных с известным количеством яиц в десятикратных серийных разведениях от 10 000 яиц (ряд 1) до одного яйца (ряд 5). Фото любезно предоставлено Медицинским исследовательским центром Сеульского национального университета.
Клонорхоз, распространенный на Дальнем Востоке, представляет серьезную проблему здравоохранения в эндемичных районах. Без лечения зараженные лица могут испытывать серьезные осложнения, такие как образование желчных камней, гнойный холангит и даже холангиокарциному.

Точный диагноз двуустки китайской (Clonorchis sinensis) важен для успешного лечения и контроля инфекции. Для диагностики клонорхоза обычно используется метод Като-Каца (KK) и/или формалин-эфирная концентрационная методика. Тем не менее обследования стула не очень эффективны, так как есть вероятность пропуска случаев заражения.

Ученые из Медицинского исследовательского центра Сеульского национального университета (Seoul National University Medical Research Center; Сеул, Корея) и их коллеги случайно выбрали из набора образцов стула жителей округа Санчхон в Корее, где клонорхоз эндемичен, а факторы риска и частота холангиокарциномы среди жителей были исследованы с 2006 года. Для каждого образца стула были проведены два мазка KK и одна полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени. Для мазка KK 41,7 мг фекалий исследовали с помощью микроскопии и умножали результат на 24, чтобы получить представление о количестве яиц в грамме (EPG) фекалий.

Для обнаружения ДНК Clonorchis sinensis был применен анализ на основе петлевой изотермической амплификации (loop-mediated isothermal amplification - LAMP). Шесть праймеров, нацеленных на восемь местоположений гена субъединицы I цитохрома c-оксидазы C. sinensis, были разработаны для видоспецифической амплификации с использованием анализа LAMP. Амплифицированные продукты LAMP были обнаружены непосредственно либо невооруженным глазом, либо путем помещения реакционной пробирки под ультрафиолетовый (УФ) свет. Кроме того, 5,0 мкл продуктов LAMP были проанализированы электрофорезом на 2%-ном агарозном геле с последующим окрашиванием бромидом этидия и визуализацией в УФ-свете.

Анализ методом LAMP был достаточно чувствительным, чтобы обнаружить всего лишь 100 фг геномной ДНК C. sinensis, а предел обнаружения в 100 мг стула был чрезвычайно низким. Анализ оказался в высокой степени специфичным, потому что перекрестная специфичность с ДНК других гельминтов, простейших или кишечной палочки не наблюдалась. Затем анализ методом LAMP применяли к образцам человеческих фекалий, собранным из района в Корее, где был распространен клонорхоз. Используя образцы, показывающие согласованные результаты как методом Като-Каца, так и ПЦР в реальном времени в качестве стандартов, анализ методом LAMP показал 97,1% чувствительность и 100% специфичность. В образцах стула с количеством яиц более 100 на грамм фекалий чувствительность достигала 100%.

Авторы пришли к выводу, что они разработали высокочувствительный и специфичный анализ методом LAMP для обнаружения ДНК C. sinensis в образцах фекалий человека. Из-за более короткого времени реакции и лучшего визуального рассмотрения и заключения о положительности без использования сложных инструментов анализ методом LAMP будет легче применять в полевых лабораториях, чем ПЦР, в качестве мощного инструмента для более конкретной и надежной диагностики клонорхоза, тем самым улучшая как программы лечения, так и контроль. Исследование было опубликовано 9 октября 2017 года в журнале "Общественная библиотека наук о забытых тропических болезнях" (Public Library of Science Neglected Tropical Diseases).

Ссылки по теме:
Медицинский исследовательский центр Сеульского национального университета


Print article

Каналы

Химия

посмотреть канал
Тест QDx Vit. D предназначен для определения уровня витамина D в цельной крови. Тест в течение 10 минут дает качественный результат путем исследования образца крови из пальца объемом 20 мкл (фото предоставлено DiaSys).

Уровни витамина D связаны с колоректальным раком

Экспериментальные и эпидемиологические исследования выносят предположения о защитной роли витамина D в колоректальном канцерогенезе,... Читать дальше

Молекулярная диагностика

посмотреть канал
Infinium CoreExome-24 Kit - набор микрочипов ДНК, который обеспечивает информацию о SNP всего генома и аллелях для генетических исследований, особенно крупномасштабных исследований генотипирования человека (фото любезно предоставлено Illumina).

Семейная генетика влияет на тип мигрени

Семейное накопление хронических заболеваний – известное явление, но его истоки недостаточно изучены. Мигрень является примером... Читать дальше

Гематология

посмотреть канал
HiSeq 4000 Systems использует инновационную технологию структурированных проточных ячеек для обеспечения быстрого и высокопроизводительного секвенирования (фото любезно предоставлено Illumina).

Молекулярные тесты являются эквивалентными анализу костного мозга на множественную миелому

Множественная миелома (ММ) представляет собой гематологическую злокачественную опухоль, характеризующуюся инфильтрацией костного... Читать дальше

Иммунология

посмотреть канал
Времяпролётный масс-спектрометр с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией SimulToF (фото любезно предоставлено Virgin Instruments).

Белковая подпись влияет на исход при метастатической меланоме

Клинические результаты метастатической меланомы при применении антител ниволумаба и пембролизумаба, действующих против PD-1... Читать дальше

Патология

посмотреть канал
Клеточные блоки, полученные методом HistoGel + этанол (EtOH), по сравнению с методами только HistoGel и только EtOH. Вставки на C и F иллюстрируют превосходную цитоморфологическую консервацию с помощью этого метода (фото любезно предоставлено онкоцентром Memorial Sloan Kettering Cancer Center).

Метод подготовки клеточных блоков модифицирован для молекулярных исследований

В настоящее время анализ с помощью биомаркеров требуется для того, чтобы сориентироваться в выборе целевых методов лечения... Читать дальше

Лаб. технология

посмотреть канал
Сканирующая электронная микрофотография клетки рака предстательной железы, захваченная на матовом стекле с помощью нанопроволоки из диоксида кремния (фото любезно предоставлено Американским химическим обществом).

Создан биочип для обнаружения клеток рака простаты

У лиц мужского пола, страдающих раком предстательной железы, некоторые опухолевые клетки выходят из предстательной железы... Читать дальше

Индустрия

посмотреть канал
Ожидается, что к 2023 году мировой рынок молекулярной диагностики вырастет до 11,54 миллиардов долларов США, что, среди прочих факторов, обусловлено ростом распространенности инфекционных заболеваний и различных видов рака (фото любезно предоставлено Shutterstock).

Глобальный рынок молекулярной диагностики достигнет 11 миллиардов долларов США к 2023 году

Ожидается, что мировой рынок молекулярной диагностики будет расти с совокупными темпами годового роста на уровне 8,4%, с... Читать дальше
Copyright © 2000-2018 Globetech Media. All rights reserved.