Мы используем технологию cookie для понимания того, как вы пользуетесь нашим сайтом. Под этим подразумевается персонализированный контент и реклама. Для того, чтобы узнать больше - нажмите сюда. Пользуясь данным сайтом вы подтверждаете согласие с нашей политикой. Политика cookie.
Разделы Партнеры Информация LinkXpress
Вход
Реклама на сайте
Direct Effect Media/Illumina

Анализ методом петлевой изотермической амплификации обнаруживает клонорхоз в образцах человека

Редакция HospiMedica - Россия
Опубликовано 14 Mar 2018
Print article
Чувствительность анализа методом петлевой изотермической амплификации (LAMP) для обнаружения яиц Clonorchis sinensis в экскрементах, экспериментально меченных с известным количеством яиц в десятикратных серийных разведениях от 10 000 яиц (ряд 1) до одного яйца (ряд 5). Фото любезно предоставлено Медицинским исследовательским центром Сеульского национального университета.
Чувствительность анализа методом петлевой изотермической амплификации (LAMP) для обнаружения яиц Clonorchis sinensis в экскрементах, экспериментально меченных с известным количеством яиц в десятикратных серийных разведениях от 10 000 яиц (ряд 1) до одного яйца (ряд 5). Фото любезно предоставлено Медицинским исследовательским центром Сеульского национального университета.
Клонорхоз, распространенный на Дальнем Востоке, представляет серьезную проблему здравоохранения в эндемичных районах. Без лечения зараженные лица могут испытывать серьезные осложнения, такие как образование желчных камней, гнойный холангит и даже холангиокарциному.

Точный диагноз двуустки китайской (Clonorchis sinensis) важен для успешного лечения и контроля инфекции. Для диагностики клонорхоза обычно используется метод Като-Каца (KK) и/или формалин-эфирная концентрационная методика. Тем не менее обследования стула не очень эффективны, так как есть вероятность пропуска случаев заражения.

Ученые из Медицинского исследовательского центра Сеульского национального университета (Seoul National University Medical Research Center; Сеул, Корея) и их коллеги случайно выбрали из набора образцов стула жителей округа Санчхон в Корее, где клонорхоз эндемичен, а факторы риска и частота холангиокарциномы среди жителей были исследованы с 2006 года. Для каждого образца стула были проведены два мазка KK и одна полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени. Для мазка KK 41,7 мг фекалий исследовали с помощью микроскопии и умножали результат на 24, чтобы получить представление о количестве яиц в грамме (EPG) фекалий.

Для обнаружения ДНК Clonorchis sinensis был применен анализ на основе петлевой изотермической амплификации (loop-mediated isothermal amplification - LAMP). Шесть праймеров, нацеленных на восемь местоположений гена субъединицы I цитохрома c-оксидазы C. sinensis, были разработаны для видоспецифической амплификации с использованием анализа LAMP. Амплифицированные продукты LAMP были обнаружены непосредственно либо невооруженным глазом, либо путем помещения реакционной пробирки под ультрафиолетовый (УФ) свет. Кроме того, 5,0 мкл продуктов LAMP были проанализированы электрофорезом на 2%-ном агарозном геле с последующим окрашиванием бромидом этидия и визуализацией в УФ-свете.

Анализ методом LAMP был достаточно чувствительным, чтобы обнаружить всего лишь 100 фг геномной ДНК C. sinensis, а предел обнаружения в 100 мг стула был чрезвычайно низким. Анализ оказался в высокой степени специфичным, потому что перекрестная специфичность с ДНК других гельминтов, простейших или кишечной палочки не наблюдалась. Затем анализ методом LAMP применяли к образцам человеческих фекалий, собранным из района в Корее, где был распространен клонорхоз. Используя образцы, показывающие согласованные результаты как методом Като-Каца, так и ПЦР в реальном времени в качестве стандартов, анализ методом LAMP показал 97,1% чувствительность и 100% специфичность. В образцах стула с количеством яиц более 100 на грамм фекалий чувствительность достигала 100%.

Авторы пришли к выводу, что они разработали высокочувствительный и специфичный анализ методом LAMP для обнаружения ДНК C. sinensis в образцах фекалий человека. Из-за более короткого времени реакции и лучшего визуального рассмотрения и заключения о положительности без использования сложных инструментов анализ методом LAMP будет легче применять в полевых лабораториях, чем ПЦР, в качестве мощного инструмента для более конкретной и надежной диагностики клонорхоза, тем самым улучшая как программы лечения, так и контроль. Исследование было опубликовано 9 октября 2017 года в журнале "Общественная библиотека наук о забытых тропических болезнях" (Public Library of Science Neglected Tropical Diseases).

Ссылки по теме:
Медицинский исследовательский центр Сеульского национального университета


Print article

Каналы

Химия

посмотреть канал
Новое исследование показывает, что ожирение, которое влияет на печень, может сыграть определенную роль в развитии болезни Альцгеймера и деменции в отдаленном будущем (фото предоставлено Deposit Photos).

На риск развития болезни Альцгеймера влияет состояние печени и диета

Сниженные уровни плазмалогенов имеют связь с повышенным риском болезни Альцгеймера. Плазмалогены вырабатываются в печени... Читать дальше

Молекулярная диагностика

посмотреть канал
Тромбоз глубоких вен (фото предоставлено Wikimedia Commons).

Предложен быстрый метод диагностирования тромбоза глубоких вен

Простой анализ крови был предложен в качестве альтернативы довольно дорогостоящей и интенсивной ультразвуковой процедуре... Читать дальше

Гематология

посмотреть канал
Мазок крови показывает гетерогенность размера периферических эритроцитов, известную как анизоцитоз (фото любезно предоставлено доктором медицины Джей Парк (Jay Park)).

Гематологические параметры прогнозируют тяжесть острого панкреатита

Острый панкреатит (ОП) - острое воспаление паренхимы поджелудочной железы, вызванное активированными ферментами поджелудочной... Читать дальше

Иммунология

посмотреть канал
Ревматоидный артрит может вызвать ряд изнуряющих симптомов, включая боль и отек в суставах, усталость и депрессию (фото любезно предоставлено SPL).

Генетические сигнатуры и биомаркеры предсказывают возникновение ревматоидного артрита

Ревматоидный артрит характеризуется воспалением суставов, приводящим к разрушению кости и хряща. Поскольку структурное повреждение... Читать дальше

Патология

посмотреть канал
Набор для обратной транскрипции Sensiscript, использующий очень небольшое количество РНК, идеально подходит для случаев применения, требующих высокой чувствительности (фото любезно предоставлено Qiagen).

Определен новый белок-мишень для выявления рака толстой кишки

Колоректальный рак (КРР) является третьим наиболее часто диагностируемым онкологическим заболеванием и третьей ведущей причиной... Читать дальше

Лаб. технология

посмотреть канал
Гибридизация нуклеиновой кислоты на электрически реконфигурируемой сети из магнитных наночастиц с золотым покрытием позволяет обнаруживать микроРНК в крови (фото любезно предоставлено Университетом Нового Южного Уэльса).

Инструмент на основе магнитных наночастиц поможет обнаруживать микроРНК

Разработан метод на основе магнитных наночастиц для непосредственного обнаружения микроРНК в необработанных образцах цельной... Читать дальше

Индустрия

посмотреть канал
По прогнозам специалистов, глобальный рынок портативного коагулогического исследования будет расти частично благодаря растущему гериатрическому населению во всем мире (фото любезно предоставлено Shutterstock).

Глобальный рынок коагулогического исследования по месту лечения обусловлен увеличением численности гериатрического населения

По прогнозам специалистов, глобальный рынок портативного тестирования на коагуляцию будет расти с совокупными темпами годового... Читать дальше
Copyright © 2000-2018 Globetech Media. All rights reserved.