Мы используем технологию cookie для понимания того, как вы пользуетесь нашим сайтом. Под этим подразумевается персонализированный контент и реклама. Для того, чтобы узнать больше - нажмите сюда. Пользуясь данным сайтом вы подтверждаете согласие с нашей политикой. Политика cookie.
Please note that the LabMedica website is also available in a complete English version
Разделы Партнеры Информация LinkXpress
Вход
Реклама на сайте
GLOBETECH PUBLISHING LLC

Проведено гомогенное исследование степени заполнения BTK

Редакция HospiMedica - Россия
Опубликовано 18 Oct 2018
Print article
Многомодовый планшет-ридер EnVision 2105 обеспечивает исключительную скорость, сверхвысокую пропускную способность и максимальную чувствительность по всем технологиям обнаружения (фото любезно предоставлено PerkinElmer).
Многомодовый планшет-ридер EnVision 2105 обеспечивает исключительную скорость, сверхвысокую пропускную способность и максимальную чувствительность по всем технологиям обнаружения (фото любезно предоставлено PerkinElmer).
Тирозинкиназа Брутона (Bruton tyrosine kinase - BTK), являющаяся членом тирозинкиназы, экспрессированной в семействе белков цитоплазмы тирозинкиназ гепатоцеллюлярной карциномы, первоначально была идентифицирована как патогенный белок в X-связанной агаммаглобулинемии, первичном иммунодефицитном заболевании человека.

BTK способствует развитию и созреванию В-клеток за счет активации регуляторов клеточного цикла и факторов дифференцировки и направляет пролиферацию и выживание В-клеток посредством регуляции апоптоза. Играя главную роль в сигнализации и выживании В-клеточного рецептора (B Cell Receptor), BTK является онкогенным фактором в хроническом лимфоцитарном лейкозе (chronic lymphocytic leukemia - CLL) человека и активированным B-клеточным подтипом диффузной B-клеточной крупноклеточной лимфомы (activated B-cell-like subtype of diffuse large B-cell lymphoma - ABC-DLBCL).

Ученые из Gilead Sciences, Inc. (Фостер-Сити, штат Калифорния, США) разработали новый дуплексный гомогенный анализ степени заполнения BTK, основанный на времяразрешенном флуоресцентном индуктивно–резонансном переносе энергии (time-resolved fluorescence resonance energy transfer - TR-FRET) для измерения свободных и общих уровней BTK в мультиплексированном формате. Анализ может измерять связывание с мишенью в мононуклеарных клетках периферической крови (peripheral blood mononuclear cells - РВМС), в образцах лимфатических узлов и костного мозга. Анализ обеспечивает точную количественную оценку степени заполнения и в настоящее время используется в текущих клинических исследованиях тирабрутиниба (tirabrutinib).

Анализ использует преимущества эмиссии на двух длинах волн конъюгированного с тербием антитела к BTK, чтобы служить в качестве донора энергии для двух флуоресцентных акцепторов энергии с четкими спектрами возбуждения и излучения: связанный с G2-стрептавидином биотинилированный тирабрутиниб обнаруживает свободный BTK и D2-связанное второе антитело к BTK, которое связывается с другим BTK-эпитопом и обнаруживает общий BTK. Кроме того, использование общего донора флуоресценции служит для нормализации обнаружения общего и свободного BTK по отношению друг к другу.

Анализ характеризуют и определяют количественно с использованием полноразмерного очищенного рекомбинантного человеческого белка BTK и РВМС, полученных от здоровых добровольцев и пациентов с CLL. Авторы демонстрируют пользу анализа, используя клетки, полученные из образцов пациентов с CLL и DLBCL. Команда использовала мультиплексированный анализ для определения свободного и полного ВТК, проведенный на 384-луночных планшетах. Обработанные планшеты были прочитаны с помощью планшет-ридера EnVision на основе лазера.

Тест TR-FRET на степень заполнения BTK был подтвержден с использованием очищенных рекомбинантных человеческих полноразмерных BTK (rBTK) и клеточных экстрактов. Основываясь на наборе из шести исследований с четырьмя повторными образцами с использованием rBTK, динамический диапазон анализа составлял от 9,75 до 312 нг/мл свободного и общего BTK. Нижний и верхний пределы количественного определения составляли 12 нг/мл (предел обнаружения 6 нг/мл) и 166 нг/мл соответственно. Вариабельность уровней свободного и общего ВТК в динамическом диапазоне полного анализа была очень низкой: коэффициент вариации составил 6% для свободного ВТК и ≤3% для общего ВТК. РВМС у пациентов с В-клеточными злокачественными новообразованиями могут демонстрировать очень высокие уровни ВТК за счет обогащения В-клеток.

Авторы пришли к выводу, что они разработали, подтвердили и квалифицировали гомогенный дуплексный анализ на основе TR-FRET для измерения активности BTK в РВМС из клинических исследований тирабрутиниба. Эффективность анализа также была продемонстрирована с использованием клеток, полученных из образцов лимфатических узлов и костного мозга у пациентов с CLL и DLBCL. Исследование было опубликовано 6 июля 2018 года в журнале "SLAS DISCOVERY: продвижение научных исследований и разработок в области биологии" (SLAS DISCOVERY: Advancing Life Sciences R&D).

Ссылки по теме:
Gilead Sciences


Print article

Каналы

Химия

посмотреть канал
Аспирантка использует новый диагностический инструмент, измеряющий метаболическую активность в крови, что позволяет отличить фибромиалгию от других состояний с хронической болью с почти 100% точностью (фото любезно предоставлено Университетом штата Огайо).

Метод метаболического фингерпринтинга позволяет диагностировать фибромиалгию

Фибромиалгия является наиболее распространенной причиной хронической генерализованной боли в США и большей частью затрагивает женщин.... Читать дальше

Молекулярная диагностика

посмотреть канал
Мутационная нагрузка опухоли, определенная целенаправленным секвенированием нового поколения, предсказывает эффективность ингибиторов контрольных точек иммунного ответа для лечения рака (фото любезно предоставлено Онкологическим институтом Рутгерса).

Мутационная нагрузка опухоли прогнозирует выживание после иммунотерапии

Изучение тысяч случаев прогрессирующего рака позволяет предположить способ определения тех опухолей, которые будут с наибольшей... Читать дальше

Иммунология

посмотреть канал
ИФА-тест PicoAMH измеряет количество антимюллерового гормона (AMH) в крови (фото любезно предоставлено Ansh Labs).

Диагностический тест помогает определить менопаузальный статус

Менопауза - это период в жизни женщины, когда у нее прекращается менструальный цикл и она перестает быть фертильной.... Читать дальше

Микробиология

посмотреть канал
Цифровая капельная ПЦР-система QX200 (фото любезно предоставлено Bio-Rad).

Олигобациллярная лепра может быть диагностирована с помощью цифрового ПЦР-анализа

Проказа, или болезнь Хансена, является хроническим бактериальным заболеванием, вызываемым Mycobacterium leprae.... Читать дальше

Патология

посмотреть канал
Гистопатология гепатоцеллюлярной карциномы: инфильтрат мононуклеарных воспалительных клеток выходит из портальных зон и разрушает сдерживающий слой из гепатоцитов, подвергающихся апоптозу, так называемый интерфейсный гепатит хронического активного гепатита. В данном случае поверхностный антиген гепатита В (HBsAg) и антитела к сердцевинному антигену гепатита В (HBcAb) были положительными. Фото любезно предоставлено Медицинской школой Университета Юты.

Вирус-ассоциированный рак печени может быть выявлен с помощью анализа крови

Вирусная инфекция, вызванная вирусом гепатита С (HCV) или вирусом гепатита B (HBV), является основной причиной рака печени... Читать дальше

Лаб. технология

посмотреть канал
Схематическое изображение чипа µLAS с двумя независимыми каналами, приводимыми в действие одинаковым давлением и напряжением. Каждый канал содержит область воронки, которая функционирует для разделения и концентрации ДНК (фото любезно предоставлено Университетом Лозанны).

Генетические методы позволяют быстро диагностировать болезнь Хантингтона

Люди с болезнью Хантингтона страдают от резких движений тела и снижения умственных способностей. Состояние обычно приводит... Читать дальше

Индустрия

посмотреть канал
По прогнозам специалистов, мировой рынок диагностики in vitro будет расти в период между 2017 и 2025 годами и к концу 2025 года достигнет почти 90 миллиардов долларов США (фото любезно предоставлено iStock).

К 2025 году мировой рынок диагностики in vitro достигнет 89 миллиардов долларов США

Мировой рынок диагностики in vitro был оценен в 55,00 миллиардов долларов США в 2016 году и, согласно прогнозам, будет расти... Читать дальше
Copyright © 2000-2019 Globetech Media. All rights reserved.