Мы используем технологию cookie для понимания того, как вы пользуетесь нашим сайтом. Под этим подразумевается персонализированный контент и реклама. Для того, чтобы узнать больше - нажмите сюда. Пользуясь данным сайтом вы подтверждаете согласие с нашей политикой. Политика cookie.
Please note that the LabMedica website is also available in a complete English version
Разделы Партнеры Информация LinkXpress
Вход
Реклама на сайте
Abbott Diagnostics

Мобильное Приложение




Проведено гомогенное исследование степени заполнения BTK

Редакция HospiMedica - Россия
Опубликовано 18 Oct 2018
Print article
Многомодовый планшет-ридер EnVision 2105 обеспечивает исключительную скорость, сверхвысокую пропускную способность и максимальную чувствительность по всем технологиям обнаружения (фото любезно предоставлено PerkinElmer).
Многомодовый планшет-ридер EnVision 2105 обеспечивает исключительную скорость, сверхвысокую пропускную способность и максимальную чувствительность по всем технологиям обнаружения (фото любезно предоставлено PerkinElmer).
Тирозинкиназа Брутона (Bruton tyrosine kinase - BTK), являющаяся членом тирозинкиназы, экспрессированной в семействе белков цитоплазмы тирозинкиназ гепатоцеллюлярной карциномы, первоначально была идентифицирована как патогенный белок в X-связанной агаммаглобулинемии, первичном иммунодефицитном заболевании человека.

BTK способствует развитию и созреванию В-клеток за счет активации регуляторов клеточного цикла и факторов дифференцировки и направляет пролиферацию и выживание В-клеток посредством регуляции апоптоза. Играя главную роль в сигнализации и выживании В-клеточного рецептора (B Cell Receptor), BTK является онкогенным фактором в хроническом лимфоцитарном лейкозе (chronic lymphocytic leukemia - CLL) человека и активированным B-клеточным подтипом диффузной B-клеточной крупноклеточной лимфомы (activated B-cell-like subtype of diffuse large B-cell lymphoma - ABC-DLBCL).

Ученые из Gilead Sciences, Inc. (Фостер-Сити, штат Калифорния, США) разработали новый дуплексный гомогенный анализ степени заполнения BTK, основанный на времяразрешенном флуоресцентном индуктивно–резонансном переносе энергии (time-resolved fluorescence resonance energy transfer - TR-FRET) для измерения свободных и общих уровней BTK в мультиплексированном формате. Анализ может измерять связывание с мишенью в мононуклеарных клетках периферической крови (peripheral blood mononuclear cells - РВМС), в образцах лимфатических узлов и костного мозга. Анализ обеспечивает точную количественную оценку степени заполнения и в настоящее время используется в текущих клинических исследованиях тирабрутиниба (tirabrutinib).

Анализ использует преимущества эмиссии на двух длинах волн конъюгированного с тербием антитела к BTK, чтобы служить в качестве донора энергии для двух флуоресцентных акцепторов энергии с четкими спектрами возбуждения и излучения: связанный с G2-стрептавидином биотинилированный тирабрутиниб обнаруживает свободный BTK и D2-связанное второе антитело к BTK, которое связывается с другим BTK-эпитопом и обнаруживает общий BTK. Кроме того, использование общего донора флуоресценции служит для нормализации обнаружения общего и свободного BTK по отношению друг к другу.

Анализ характеризуют и определяют количественно с использованием полноразмерного очищенного рекомбинантного человеческого белка BTK и РВМС, полученных от здоровых добровольцев и пациентов с CLL. Авторы демонстрируют пользу анализа, используя клетки, полученные из образцов пациентов с CLL и DLBCL. Команда использовала мультиплексированный анализ для определения свободного и полного ВТК, проведенный на 384-луночных планшетах. Обработанные планшеты были прочитаны с помощью планшет-ридера EnVision на основе лазера.

Тест TR-FRET на степень заполнения BTK был подтвержден с использованием очищенных рекомбинантных человеческих полноразмерных BTK (rBTK) и клеточных экстрактов. Основываясь на наборе из шести исследований с четырьмя повторными образцами с использованием rBTK, динамический диапазон анализа составлял от 9,75 до 312 нг/мл свободного и общего BTK. Нижний и верхний пределы количественного определения составляли 12 нг/мл (предел обнаружения 6 нг/мл) и 166 нг/мл соответственно. Вариабельность уровней свободного и общего ВТК в динамическом диапазоне полного анализа была очень низкой: коэффициент вариации составил 6% для свободного ВТК и ≤3% для общего ВТК. РВМС у пациентов с В-клеточными злокачественными новообразованиями могут демонстрировать очень высокие уровни ВТК за счет обогащения В-клеток.

Авторы пришли к выводу, что они разработали, подтвердили и квалифицировали гомогенный дуплексный анализ на основе TR-FRET для измерения активности BTK в РВМС из клинических исследований тирабрутиниба. Эффективность анализа также была продемонстрирована с использованием клеток, полученных из образцов лимфатических узлов и костного мозга у пациентов с CLL и DLBCL. Исследование было опубликовано 6 июля 2018 года в журнале "SLAS DISCOVERY: продвижение научных исследований и разработок в области биологии" (SLAS DISCOVERY: Advancing Life Sciences R&D).

Ссылки по теме:
Gilead Sciences


Print article
BIOHIT  Healthcare OY

Каналы

Химия

посмотреть канал
Новый анализ крови гарантирует практически мгновенную постановку диагноза сердечного приступа с использованием недавно открытого биомаркера белка (фото любезно предоставлено iStock).

Разработан новый анализ крови на инфаркт миокарда

Уровень сердечного миозин-связывающего белка C (cMyC) в крови после инфаркта миокарда повышается быстрее и в большей степени,... Читать дальше

Молекулярная диагностика

посмотреть канал
Цветная электронная микрофотография, показывающая малярийного паразита (справа, синего цвета), сцепленного с эритроцитом человека. На вставке показан фрагмент точки контакта при большем увеличении (фото любезно предоставлено [США] NIAID через Wikimedia Commons).

Анализ капли крови позволит осуществлять мониторинг устойчивости к противомалярийным препаратам

Разработан новый метод анализа ДНК непосредственно по капле крови, который поможет осуществлять мониторинг развития устойчивости... Читать дальше

Иммунология

посмотреть канал
Уникальный наконечник для пипетки, созданный на 3D-принтере, для проведения иммуноферментных анализов (фото любезно предоставлено Университетом Коннектикута).

Новая технология 3D-печати снижает стоимость иммуноферментного анализа

Традиционный иммуноферментный анализ (ИФА) проводят на планшетах с 96 микролунками; каждая лунка работает как отдельная испытательная... Читать дальше

Микробиология

посмотреть канал
Цифровая капельная ПЦР-система QX200 (фото любезно предоставлено Bio-Rad).

Олигобациллярная лепра может быть диагностирована с помощью цифрового ПЦР-анализа

Проказа, или болезнь Хансена, является хроническим бактериальным заболеванием, вызываемым Mycobacterium leprae.... Читать дальше

Патология

посмотреть канал
Портативное устройство MasSpec Pen, которое можно подключить к масс-спектрометру для диагностики рака яичников и других видов рака (фото любезно предоставлено Техасским университетом в Остине).

Устройство Masspec Pen одобрено для быстрой диагностики рака

Рак яичников является заболеванием c чрезвычайно высокой смертностью и пятой по значимости причиной всех связанных с раком... Читать дальше

Лаб. технология

посмотреть канал
Наноэлектронный анализ: клетки крови в напряженном состоянии могут выступать в качестве биомаркера хронической усталости (фото любезно предоставлено The Scientist).

Разработан биомаркерный тест, который поможет выявлять синдром хронической усталости

Миалгический энцефаломиелит, или синдром хронической усталости (МЭ/СХУ), является серьезным заболеванием, которое может затронуть... Читать дальше

Индустрия

посмотреть канал
По прогнозам специалистов, мировой рынок диагностики in vitro будет расти в период между 2017 и 2025 годами и к концу 2025 года достигнет почти 90 миллиардов долларов США (фото любезно предоставлено iStock).

К 2025 году мировой рынок диагностики in vitro достигнет 89 миллиардов долларов США

Мировой рынок диагностики in vitro был оценен в 55,00 миллиардов долларов США в 2016 году и, согласно прогнозам, будет расти... Читать дальше
Copyright © 2000-2019 Globetech Media. All rights reserved.