Мы используем технологию cookie для понимания того, как вы пользуетесь нашим сайтом. Под этим подразумевается персонализированный контент и реклама. Для того, чтобы узнать больше - нажмите сюда. Пользуясь данным сайтом вы подтверждаете согласие с нашей политикой. Политика cookie.
Разделы Партнеры Информация LinkXpress
Вход
Реклама на сайте
GLOBETECH PUBLISHING LLC

Проведено гомогенное исследование степени заполнения BTK

Редакция HospiMedica - Россия
Опубликовано 18 Oct 2018
Print article
Многомодовый планшет-ридер EnVision 2105 обеспечивает исключительную скорость, сверхвысокую пропускную способность и максимальную чувствительность по всем технологиям обнаружения (фото любезно предоставлено PerkinElmer).
Многомодовый планшет-ридер EnVision 2105 обеспечивает исключительную скорость, сверхвысокую пропускную способность и максимальную чувствительность по всем технологиям обнаружения (фото любезно предоставлено PerkinElmer).
Тирозинкиназа Брутона (Bruton tyrosine kinase - BTK), являющаяся членом тирозинкиназы, экспрессированной в семействе белков цитоплазмы тирозинкиназ гепатоцеллюлярной карциномы, первоначально была идентифицирована как патогенный белок в X-связанной агаммаглобулинемии, первичном иммунодефицитном заболевании человека.

BTK способствует развитию и созреванию В-клеток за счет активации регуляторов клеточного цикла и факторов дифференцировки и направляет пролиферацию и выживание В-клеток посредством регуляции апоптоза. Играя главную роль в сигнализации и выживании В-клеточного рецептора (B Cell Receptor), BTK является онкогенным фактором в хроническом лимфоцитарном лейкозе (chronic lymphocytic leukemia - CLL) человека и активированным B-клеточным подтипом диффузной B-клеточной крупноклеточной лимфомы (activated B-cell-like subtype of diffuse large B-cell lymphoma - ABC-DLBCL).

Ученые из Gilead Sciences, Inc. (Фостер-Сити, штат Калифорния, США) разработали новый дуплексный гомогенный анализ степени заполнения BTK, основанный на времяразрешенном флуоресцентном индуктивно–резонансном переносе энергии (time-resolved fluorescence resonance energy transfer - TR-FRET) для измерения свободных и общих уровней BTK в мультиплексированном формате. Анализ может измерять связывание с мишенью в мононуклеарных клетках периферической крови (peripheral blood mononuclear cells - РВМС), в образцах лимфатических узлов и костного мозга. Анализ обеспечивает точную количественную оценку степени заполнения и в настоящее время используется в текущих клинических исследованиях тирабрутиниба (tirabrutinib).

Анализ использует преимущества эмиссии на двух длинах волн конъюгированного с тербием антитела к BTK, чтобы служить в качестве донора энергии для двух флуоресцентных акцепторов энергии с четкими спектрами возбуждения и излучения: связанный с G2-стрептавидином биотинилированный тирабрутиниб обнаруживает свободный BTK и D2-связанное второе антитело к BTK, которое связывается с другим BTK-эпитопом и обнаруживает общий BTK. Кроме того, использование общего донора флуоресценции служит для нормализации обнаружения общего и свободного BTK по отношению друг к другу.

Анализ характеризуют и определяют количественно с использованием полноразмерного очищенного рекомбинантного человеческого белка BTK и РВМС, полученных от здоровых добровольцев и пациентов с CLL. Авторы демонстрируют пользу анализа, используя клетки, полученные из образцов пациентов с CLL и DLBCL. Команда использовала мультиплексированный анализ для определения свободного и полного ВТК, проведенный на 384-луночных планшетах. Обработанные планшеты были прочитаны с помощью планшет-ридера EnVision на основе лазера.

Тест TR-FRET на степень заполнения BTK был подтвержден с использованием очищенных рекомбинантных человеческих полноразмерных BTK (rBTK) и клеточных экстрактов. Основываясь на наборе из шести исследований с четырьмя повторными образцами с использованием rBTK, динамический диапазон анализа составлял от 9,75 до 312 нг/мл свободного и общего BTK. Нижний и верхний пределы количественного определения составляли 12 нг/мл (предел обнаружения 6 нг/мл) и 166 нг/мл соответственно. Вариабельность уровней свободного и общего ВТК в динамическом диапазоне полного анализа была очень низкой: коэффициент вариации составил 6% для свободного ВТК и ≤3% для общего ВТК. РВМС у пациентов с В-клеточными злокачественными новообразованиями могут демонстрировать очень высокие уровни ВТК за счет обогащения В-клеток.

Авторы пришли к выводу, что они разработали, подтвердили и квалифицировали гомогенный дуплексный анализ на основе TR-FRET для измерения активности BTK в РВМС из клинических исследований тирабрутиниба. Эффективность анализа также была продемонстрирована с использованием клеток, полученных из образцов лимфатических узлов и костного мозга у пациентов с CLL и DLBCL. Исследование было опубликовано 6 июля 2018 года в журнале "SLAS DISCOVERY: продвижение научных исследований и разработок в области биологии" (SLAS DISCOVERY: Advancing Life Sciences R&D).

Ссылки по теме:
Gilead Sciences


Print article

Каналы

Химия

посмотреть канал
Более высокие уровни воспалительного биомаркера растворимого рецептора-1  фактора некроза опухоли (sTNFR-1) связаны с ухудшением функции почек у здоровых взрослых людей (фото любезно предоставлено Enbrel).

Уровни воспалительного маркера связаны с ухудшением функции почек

Рецептор-1 фактора некроза опухоли (TNFR-1), который играет важную роль в дисфункции эндотелиальных клеток и воспалении,... Читать дальше

Молекулярная диагностика

посмотреть канал
Идентифицирована рекомбинация генов в нейронах, которая продуцирует тысячи новых вариантов генов в мозге человека с болезнью Альцгеймера (фото любезно предоставлено Институтом медицинских открытий Сенфорд Бернам Пребис).

Рекомбинация ДНК в головном мозге связана с болезнью Альцгеймера

Болезнь Альцгеймера представляет собой кризисную ситуацию для общественного здравоохранения. Причина этого заболевания остается... Читать дальше

Иммунология

посмотреть канал
Система IMMULITE 1000 – небольшой настольный иммунологический анализатор (фото предоставлено Siemens Healthcare Diagnostics).

Уровни IgA-нефропатии связаны с тяжестью заболевания

IgA- нефропатия (IgAN) является наиболее распространенной причиной первичного гломерулонефрита. IgAN может предопределять... Читать дальше

Микробиология

посмотреть канал
Набор Loopamp Malaria Pan Detection Kit - это качественный тест на обнаружение возбудителей малярии (Plasmodium ovale, P. vivax, P. malariae и P. falciparum) в образцах крови человека (фото любезно предоставлено Human Diagnostics Worldwide).

Комбинированные ДНК-технологии проанализированы на диагностику малярии

Малярия является одним из наиболее важных паразитарных инфекционных заболеваний, риску заражения которыми подвержена почти... Читать дальше

Патология

посмотреть канал
Иммуноокрашивание клеток рака молочной железы, рисунок распределения индекса Ki67 в клетках рака молочной железы (фото предоставлено Сегедским университетом).

Типы вариантов риска рака молочной железы определяют агрессивность опухоли

Термин “интервальный рак молочной железы” применяется для опухолей, обнаруженных в течение года после маммографического скрининга,... Читать дальше

Лаб. технология

посмотреть канал
Cap-Score обнаруживает и анализирует картины локализации с использованием флуоресцентной микроскопии, чтобы отличить способных к зачатию сперматозоидов от не способных (фото любезно предоставлено Androvia LifeSciences).

Созданы тесты, показывающие уровень мужской репродуктивной способности

Мужская фертильность является серьезной проблемой, вызывающей беспокойство во всем мире. Тем не менее область андрологии... Читать дальше

Индустрия

посмотреть канал
Ожидается, что глобальный рынок анализаторов гемостаза/коагуляции к 2026 году вырастет до 9,55 миллиардов долларов США, что обусловлено большей частью ростом числа заболеваний крови (фото любезно предоставлено Analyticon Biotechnologies.

Глобальный рынок анализаторов гемостаза/коагуляции достигнет 9,5 миллиардов долларов США к 2026 году

В 2017 году глобальный рынок анализаторов гемостаза/коагуляции оценивался в 3,65 миллиардов долларов США, и ожидается, что... Читать дальше
Copyright © 2000-2018 Globetech Media. All rights reserved.